LAD2 人肥大细胞

  LAD2 人肥大细胞说明书 

一、细胞基本信息

细胞全称：LAD2 人肥大细胞系

细胞来源：人急性髓系白血病患者外周血分离建立的永生化肥大细胞系

细胞特性：悬浮或半贴壁生长，保留成熟肥大细胞核心表型，表达FcεRI高亲和力IgE受体、受IgE交联刺激后可稳定释放组胺、β-己糖胺酶等炎症介质，是目前过敏相关研究常用的人源肥大细胞模型。

推荐应用场景：IgE介导的过敏反应机制研究、肥大细胞活化抑制剂药物筛选、炎症因子释放通路验证。

二、培养基配方

该细胞对营养要求较高，常规RPMI 1640基础培养基需针对性补充关键组分：

基础培养基：RPMI 1640 

血清添加：10% 热灭活胎牛血清，提前筛选适配的稳定血清批次

核心添加剂：重组人IL-3 10 ng/mL、重组人SCF（干细胞因子）100 ng/mL

可选添加：双抗1%，避免支原体污染

三、标准传代操作流程

培养条件：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱中静置培养

传代密度：严格维持细胞接种密度在 ‌2×10^5 个/mL‌，最高培养密度不超过1×10^6 个/mL，密度过高会导致细胞活率骤降、表型丢失

传代操作：无需消化，直接在超净台内吸取部分细胞悬液，用预热的新鲜培养基按1:2~1:3的比例稀释分瓶，补加新鲜培养基后放回培养箱即可。

换液策略：每2~3天半量换液，离心收集细胞后弃去一半旧培养基，加入等量预热新鲜培养基重悬，避免全量换液导致细胞自分泌生长因子丢失，引发细胞凋亡。

四、关键质控与注意事项

活率要求：正常培养状态下细胞活率应长期维持在90%以上，活率低于80%时需检查SCF、IL-3活性是否失效，或血清批次是否适配。

表型验证：每10代需通过流式细胞术验证FcεRI、CD117（c-Kit）的阳性表达率，确认细胞未发生表型漂移。

活化实验标准操作：开展IgE介导脱颗粒实验时，提前用特异性IgE抗体致敏细胞过夜，次日加入抗原交联刺激，30分钟后检测上清中β-己糖胺酶释放率，正常活化组释放率应达到总酶活的30%~50%。

禁忌：绝对不能使用不含SCF的培养基长期培养细胞，会在3~5天内快速引发细胞凋亡、肥大细胞核心功能表型丢失。

神经元细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾癌组织源性原代细胞包装：5 × 105次方（1ml）/1ml

肾成纤维细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾动脉平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾近曲管状上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾皮层上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾实质细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾实质细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾实质细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾实质细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾系膜细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾系膜细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾系膜细胞包装：5 ×105次方（1ml）

肾系膜细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小管上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小管上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小管上皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小球内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小球内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

肾小球内皮细胞包装：5 × 105次方（1ml）

食管癌组织源性原代细胞包装：5 × 105次方（1ml）/1ml

食管平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

食管平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

食管平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）

食管平滑肌细胞包装：5 × 105次方（1ml）