乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒(可见显色法)科研

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 200μL×1 支，4℃保存；

试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×2 瓶，4℃保存。

产品简介：

产品名称：乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒(可见显色法)科研

规格：48样 96样

货号：AS288

检测方法：可见分光光度法 微板法

产品分类：呼吸代谢途径系列

贮存温度：2～8℃。

本试剂盒保质期：6个月。本产品仅用于科研实验。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验

样本和试剂浪费！

1、样本制备

① 组织样本：

取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；

12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10

4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

硅酸盐细菌培养基（不含琼脂） 英文名称：Silicate bacteria medium(without Agar) 产品规格：250g

硅酸盐细菌培养基（含琼脂） 英文名称：Silicate Bacteria Medium 产品规格：250g

半稀释液 英文名称：Cysteine Diluent 产品规格：250g

JM培养基基础 英文名称：JM Medium Base 产品规格：250g

果蝇培养基 英文名称：Drosophila medium 产品规格：250g

磁细菌分离培养基 英文名称：Media for isolation of magnetotactic bacteria 产品规格：100g

铁细菌培养基 英文名称：Iron bacteria medium 产品规格：250g

放线菌培养基(改良高氏1号) 英文名称：Actinomycetes culture medium 产品规格：250g

改良GAM琼脂 英文名称：GAM Agar,Modified 产品规格：250g

改良GAM肉汤 英文名称：GAM Broth,Modified 产品规格：250g

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操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。