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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
脯氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒科研 | 紫外分光光度法 微板法 | 48样 96样 | AS373 |
试剂组成和配制
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×5 瓶,-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入4.5mL试剂二充分混匀。(3天使用完)
样品处理
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g 离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g 离心5min,取全部上清于4℃、100000g 离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
3. 血清:直接测定。
优点如下:
1、快速简便:操作时间短,48-50T,可测40例样本左右,96-100T,可测80例样本左右;
2、取样量微:常规操作取样量50l, 酶标仪操作仅需5l即可检测,部分试剂盒取样多少请;
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效;
4、再现性好:20倍稀释线性仍然良好;
5、回收试验: X =99%;
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强;
7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物。
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
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