基因染料法PCR试剂盒(50T)

基因染料法PCR试剂盒(50T)产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

准备物品：

清理液（A）：毫升

染色液（t B）：微升

稀释液（C）：毫升

溶解液（tD）：毫升

产品说明书：1份

基因染料法PCR试剂盒(50T)PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

注意事项：

①加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

10-酰基-3,7-二羟基吩嗪20mg

CCL26 Signal peptide核因子1A抗体

CCL26环一螺旋蛋白1抗体

chemerin肿瘤转移抑制基因H4抗体

C5orf55 神经元衍生孤儿受体1抗体

CXCR7轴突生长诱向因子4抗体

COX7A2脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4抗体

CD36细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体

CYP11B2线粒体复合物NDUFS7蛋白抗体

基因染料法PCR试剂盒犀草进口/国产phospho-c-Abl(Thr754)  酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量：HPLC≥98%

木犀草苷进口/国产FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L岩藻糖苷酶抗体含量：HPLC≥98%

没食子酸进口/国产TNFR1/TNF Receptor I  肿瘤坏死因子受体1抗体含量：HPLC≥98%

蒙花苷进口/国产HHV8/ORF K14  人类疱疹病8 ORF14抗体含量：HPLC≥97%

莽草酸进口/国产SEMA6D  轴突导向因子SEMA6D抗体含量：HPLC≥98%

芹菜进口/国产plant lectin B4/IB4  植物凝集IB4含量：HPLC≥98%

青藤进口/国产SNX1/Sorting nexin1  分选连接蛋白1抗体含量：HPLC≥98%