病毒基因组 DNA/RNA 快速提取试剂盒公司正在出售的产品：猪（莱芜）腹部脂肪干细胞（永生化） 20号染色体开放阅读框165封闭多肽 腺病毒通用PCR检测试剂盒 大鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒 3磷酸甘油酸激酶(PGK)酶活性比色法检测试剂盒 玉蜀黍长蠕孢 卷曲螺旋结构域蛋白148抗体
更新时间：2024-01-12
商品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
病毒基因组 DNA/RNA 快速提取试剂盒 | 50 次 | A-Hc2009 |
PCR基本步骤及注意事项？
一、实验原理
PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法，它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而体外PCR反应同样需要类似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列，实现对特定位置的扩增；PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境；反应过程同生物体内一样，DNA双链打开，引物结合模板，延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链，而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链，在退火温度处引物结合到模板上，最后在72℃完成延伸，并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子，进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。
在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增，达到较高水平。因此，应适当调节循环次数，在平台期前结束反应， 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
二、主要的成分
1.模板可以是多种形式，主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物，cDNA等，但不能为RNA。对于不同类型的模板，其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够，质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。
注意cDNA为单链DNA，但仍可做PCR的模板，只不过在第一轮循环时只有一个引物结合，合成另一条链。从第二轮开始，两个引物均与特异位点结合，从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增，原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶，只能特意识别DNA链。
2.对于模版的量来说，一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂，提取的浓度也往往比较大，为防止浓度过大对PCR造成影响，故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单，且提取浓度一般较低，则无需稀释。
PCR实验中应该注意的问题有哪些?
没有ct值
检测结果遇到没有Ct值情况,排查是否有以下问题:
1、循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);
2、PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;
3、引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;
4、模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可), 对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,应考虑样本准备中杂质的引入及反复冻融的情况,建议将模板样本小量分装储备,避免反复冻融;
5、引物探针是否合适(尤其是引物跨越内含子,以确保扩增基因组DNA;上下游引物Tm值超过4℃以上也会影响扩增)。
ct值过晚
在相对定量中, Ct值一般控制在15—25之间比较好,如果在绝对定量中, 对低拷贝数的样品,Ct值会增大, 但是一般不宜超过40循环, 否则定量不准确。
因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情况, 需要根据具体实验设计和目的进行。
1、扩增效率低。引物之间或者引物和探针的比例不合适, 需要进行优化;引物或探针设计不合理, 需要重新设计;
2、PCR程序不合适, 改用三步法进行反应, 或者优化退火/延伸温度, 可以适当降低退火温度; 退火/延伸时间短(可以在推荐的时间条件下延长10s);
3、MgCl2浓度不合适,增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足;
4、PCR产物太长。PCR产物设计超过500bp;
5、模板中存在抑制物。用高纯度模板进行PCR检测或将模板进行稀释。
公司正在出售的产品：
猪葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 二氢嘧啶酶样3ELISA试剂盒 DPYSL3免费代测试剂 | 甲型流感）病毒H6亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
冬瓜皮染料法PCR鉴定试剂盒 | 表面膜免疫球蛋白DELISA试剂盒 mIgD免费代测试剂 | 丁型肝炎病毒PCR检测试剂盒直销 |
山羊痘病毒PCR检测试剂盒 | 补体成分1q子成分样蛋白1ELISA试剂盒 | 难辨梭状芽胞杆菌PCR检测试剂盒 |
水痘带状疱疹病毒即人疱疹病毒型PCR检测试剂盒 | 玻连蛋白/体外粘连蛋白ELISA试剂盒 | 奈瑟菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 |
利什曼原虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 超磷酸化微管相关蛋白tauELISA试剂盒 | 洋葱伯克氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
犬腺体病毒2型(犬传染性喉气管炎病毒）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 刺猬酰基转移酶ELISA试剂盒 | 乙型肝炎病毒核酸定量及YMDD变异联合PCR测定试剂盒 |
饶氏无绿藻PCR检测试剂盒 | 单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体ELISA试剂盒 | 牛传染性胸膜肺炎染料法荧光定量PCR试剂盒 |
利什曼原虫PCR检测试剂盒 | 蛋白ATP1B4ELISA试剂盒 | 马立克氏病病毒PCR检测试剂盒供应 |
鲤疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 蛋白酪磷酸酶受体NELISA试剂盒 | 泌尿道致病性大肠杆菌(UPEC)探针法荧光定量PCR试剂盒 |
犬流感病毒32型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 动力蛋白激活蛋白1ELISA试剂盒 | 南极犬牙鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 |
柯萨奇 A16 型核酸检测试剂盒 | 人核因子κB抑制物激酶β(IKK-β)试剂盒ELISA | 牛分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
病毒H5/H9亚型PCR检测试剂盒（荧光PCR法） | 人基质金属蛋白酶7(MMP-7)elisa试剂盒 | 禽腺病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
鲤疱疹病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 人钙依赖性胞浆型磷脂酶A2(iPLA2)ELISA检测试剂盒 | 同斑节对虾杆状病毒PCR检测试剂盒 |
产气克雷伯氏菌PCR检测试剂盒 | 人L选择素(L-Selectin/CD62L)试剂盒 ELISA | 病毒基因组 DNA/RNA 快速提取试剂盒光滑念珠菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
兔黏液瘤病毒PCR检测试剂盒 | 人白介素31(IL-31)检测试剂盒elisa | 牛分支杆菌卡介苗PCR检测试剂盒 |
