细胞接收后的操作流程与注意事项

1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

2. 如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

3. 贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

4. 生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。

细胞常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）

1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3. 取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，于培养箱中培养。

4. 注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。