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ELISA试剂盒严谨的操作过程,得出准确的测试结果
点击次数:602 更新时间:2019-03-04
  ELISA试剂盒严谨的操作过程,得出准确的测试结果
  ELISA试剂盒的基础是抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。同时结合在固相载体表面的抗原或抗体任然能够保证其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据呈色的深浅进行定性或定量分析。同时因为酶的催化频率很高,所以极大的放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
  ELISA试剂盒的测试模式比较常见的有双抗体夹心法,具体的测定方法如下:
  1、首先用双抗体之一在2-8℃的碳酸盐缓冲液中过夜浸泡,形成固相抗体,洗涤去除没有和固相结合或者结合的不牢固的抗体之后,用小牛血清或者牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分和杂质。
  2、加入需要测定的临床样本,温育一定时间。等待需要测定的抗原就会和固相上特异抗体结合而吸附在固相上。
  3、加入酶标记的双抗体之二,温育一定时间。在固相上会形成双抗体与特异抗原的夹心产物。
  4、加入酶底物,温育显色测定。
  ELISA试剂盒的这一方法我们有两步温育的步骤,我们平常称之为“两步法”,现在为了简化操作步骤,很多推出了“一步法”试剂盒,也就是将上述的2和3合并为了一步,但是虽然一步法相比两步法操作简单,但是也有他的缺陷,容易造成勾状效应,出现假阴性或定量偏低的结果。