上海抚生ELISA流程的说明

   上海抚生物科技有限公司是一家专注于生物的技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的、销售。并代理销售，致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供的科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学 、细胞生物学、免疫学 ELISA试剂盒等生物科技实验需求。目前很多客户因为对品牌的信任度问题，公司仍然是一个非常好的选择上海抚生ELISA试剂盒，是 你不二的选择。

剩余的试剂盒材料要妥善保存

标准品分装后按说明书要求的温度保存，这样可以避免污染，对要求冷冻保存的标准品还可以避免反复冻融；酶标板放回锡箔纸袋，加入干燥剂，封紧封口，4℃保存。忌未将酶标板*平衡至室温，就放回锡箔纸袋，因为此时由于温度差，酶标板上会有水汽，不利于稳定保存。

加样要快速准确，避免气泡

加样时间宜控制在 15 分钟内。加样前要将样本混匀，特别是冻存后融化的样本（自然融化的血清等样本会有分层现象），应上下颠倒充分混匀，注意动作轻缓，避免产生气泡。如冻存融化后的样本有沉淀，可以再次离心。整个加样过程都要注意避免产生气泡。气泡会影响蛋白的相互结合，而影响反应进行。

孵育时要保证温度均匀，防止挥发变干

孵育时压紧封口膜。多块板一起实验时，要平放各板，不要叠放，以免因温度不均造成漂移或边缘效应。

洗板机的应用

使用洗板机，不但可以降低劳动强度，而且有利于保证 ELISA 测试的稳定性。目前的全自动洗板机不但具有很多实用的洗涤动作，如底部冲洗，两点吸液，震动，交叉吸液；还可以根据需要调节冲洗压力，冲洗距离，冲洗时间等参数。通过优选这些动作和参数，能保证良好的洗涤效果。洗板机的性能对于结果准确性影响也很大，好的洗板机要保证洗板后的残留液尽可能的少，一般不超过 2μL，以洗涤后用人工拍板垫纸不湿为准。应定期检查抽吸针头是否堵塞。洗液如果含有吐温，应随用随配。

手动洗板的操作指南

加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制，以免被其他试剂污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍板，选用无粉尘和碎屑的吸水纸。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁；但也不能太重，不能让样品干太久。酶标板拍干后立即做后续的加液。

显色反应的关键点

ELISA 实验是个酶促底物显色反应，随时间增加，显色变深，所以选择*佳时间终止反应是得到准确的标准的曲线和样本浓度的重要因素。终止过程要*。使用的 TMB 底物时*终止点是黄色，不会有任何程度的蓝色或绿色，终止过程中必要时可以震荡 96 孔板，或用枪头抽吸混匀（终止液含强酸，避免腐蚀）。

 数据分析

按照说明书推荐的数据分析方法做曲线拟合及分析。说明书中的标准曲线是在的实验室中，由非常有经验的操作人员得到的结果。客户的标准曲线和说明书中的标准曲线可能存在不同，但不等于不好。通常判断标准曲线合格的标准为：：背景OD 值 <0.2；点 OD 值>1.0；相关系数 R2 接近或等于 1。只要满足这些条件的标准曲线都是可以使用的。