上海抚生兔ELISA试剂盒操作及保存方法

每当暑假一到,我都会很高兴.想到有两个月的时间可以不用上课,那简直就是一年当中美好的时光了.　　每当暑假一到,我都会很高兴.想到有两个月的时间可以不用上课,那简直就是一年当中美好的时光了.　小编接下来介绍　兔ELISA试剂盒操作及保存方法。

样品收集、处理及保存：

　　1、细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。

　　2、细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104

　　-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。

　　3、血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。

　　4、血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上

　　清。

　　5、体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。

　　6、组织标本：切取组织标本，称取重量0、5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000

　　rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。

　　7、样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　8、保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　兔ELISA试剂盒操作步骤：

　　1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育：操作同3。

　　8、洗涤：操作同5。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。