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以下五个问题 让你更了解蛋白检测
点击次数:547 更新时间:2019-08-15
  问题一:可以提供哪几类蛋白样品?
  解答:待检测的蛋白样品可以是蛋白溶液、蛋白冻干粉或直接切胶的湿胶块。对于Western Blotting,在PVDF膜上的蛋白样品,是无法回收进行试验的。
  问题二:蛋白样品如何保存适宜?
  解答:蛋白样品不要像平时试验一样,放在缓冲溶液中保存,因为不同的缓冲液体系中的无机盐成份,会严重干扰蛋白检测结果。如切胶后的胶条直接放在EP管中,低温保存即可。
  问题三:如何避免待检测蛋白的二次污染问题?
  解答:很多客户抱怨蛋白纯度无法达到要求,检测结果不理想,并且会出现莫名其妙的角蛋白峰。这是典型的实验过程中二次污染,这种二次污染源就是我们的实验习惯。蛋白质谱检测中的角蛋白峰主要在染胶、脱色、切胶和酶解过程中引入的,其来源包括我们的皮肤屑,头皮屑,衣物上的动植物蛋白等,因此在试验关键操作过程中,如切胶一定要身穿实验服,佩戴手套,口罩和发套在通风橱中进行;洗染胶的容器也需要使用70%的酒精清洗,再使用去离子水冲洗,实验过程专心致志,做到快速、准确。
  问题四:蛋白浓度偏低,如何浓缩?
  解答:可以使用超滤法浓缩,对蛋白性质不会有改变,蛋白种类也不容易丢失,但是损耗比较大,甘油和去垢剂等会堵塞滤膜,影响效果;也可以使用冻干法,对样品进行低温冷冻干燥浓缩;常见的还有沉淀法,该方法容易操作并且方便快捷,但是可能会有部分种类的蛋白无法沉淀导致蛋白种类丢失。
  问题五:提供多少蛋白质才能满足实验要求?
  解答:正常情况下,使用考马斯亮蓝染色能够看见的点,就有机会鉴定出来,将蛋白质收集后邮寄给钟鼎生物即可,不同的检测项目,对蛋白质的需要量是不同的,但是为了便于我们操作,请提供足量的蛋白,尽量保证浓度大于1mg/ml,蛋白纯度大于90%,在条件允许情况下蛋白质的量越多越好,单项检测少不得低于5ug。