微生物菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境。菌种活化是指将长期保存的菌种恢复到具有生长活力的状态，以便于进一步的培养和使用。根据菌种的保存方式，活化方法可以分为以下几种：

1. 冻干粉或载体保存形式的活化：

  首先，将冻干粉或载体保存的菌株加入少量生理盐水或非选择性肉汤培养基中进行溶解悬浮。

  使用划线或涂布方式接种至平板，或吸取菌液至液体培养基中进行培养。

2. 甘油冻存或液体保存形式的活化：

  在室温下快速融化，然后进行划线或涂布接种至平板，或直接加入到液体培养基中进行培养。

3. 瓷珠形式的活化：

  挑取单个瓷珠在平板上滚动数次或直接加入到液体培养基中进行培养。

4. 斜面或半固体形式的活化：

  直接挑取菌苔转接至平板或液体培养基中进行培养。

5. 具体操作步骤：

  准备培养基：根据菌种类型选择合适的培养基，如胰酪大豆胨液体/琼脂培养基、营养肉汤/琼脂培养基等。

  活化过程：

1) 第一代活化：从冻存管或斜面挑取菌种，接种至固体斜面或液体培养基，在适宜温度下静置培养（如细菌37℃, 24小时）。

2) 扩大培养：将活化的菌液按1%5%接种量转移至新鲜液体培养基，摇床振荡培养至对数生长期。

  注意事项：严格无菌操作，超净台酒精灯旁接种；若菌株生长缓慢，可延长培养时间或添加特定生长因子。

6. 复苏冻干菌株：

  开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，再打开使用。

  复活：选择合适的培养基和培养条件进行复活，第1次活化最好在非选择性琼脂培养基上进行。

  传代次数：冻干菌株的传代次数不得超过5代。

7. 工作菌株确认：

  1）、使用无菌接种环在相应的培养基平板上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养。

  2）、观察菌落状态，挑取单一纯菌落，进行革兰染色、镜检，确认菌种。

通过这些方法，可以有效地活化并复苏微生物菌种，确保其在后续实验中的活力和纯度。