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ELISA(酶联免疫吸附测定)样本不显色解读
点击次数:144 更新时间:2025-07-21

ELISA(酶联免疫吸附测定)中,如果标准品显色但样本不显色,可能由以下几个原因造成:

1. 样本保存或处理不当:如果样本在保存或处理过程中发生了降解,或者样本中待检测的抗原浓度过低,都可能导致样本不显色。

2. 抗体特异性或浓度问题:使用的捕获抗体和检测抗体可能与样本中的抗原不匹配,或者抗体浓度不足,导致特异性结合不充分。

3. 孵育条件不适宜:孵育温度、时间或缓冲液条件不适当,可能影响抗原抗体的结合效率。

4. 封闭不充分或封闭液问题:封闭步骤如果未充分进行,可能会导致非特异性结合增加,从而掩盖了特异性信号。

5. 显色时间不足:标准品显色时间可能比样本所需时间长,如果样本孔的显色时间不够,也可能导致不显色。

6. 终止液问题:加入终止液后,如果终止液不正确,可能提前终止了显色反应,导致样本孔不显色。

7. 显色剂保存不当:如果显色剂如TMB在使用前已经变色或氧化,会影响最终的显色效果。

8. 仪器读数问题:酶标仪的波长设置、滤光片选择或仪器本身的问题,可能影响到样本孔的读数。

解决方法:

1. 检查样本保存和处理过程,确保样本未降解且抗原浓度足够。

2. 验证抗体的特异性及浓度,必要时更换抗体。

3. 确保孵育条件符合说明书要求。

4. 仔细执行封闭步骤,如果封闭不充分,尝试增加封闭时间或调整封闭液的浓度。

5. 确认显色时间,确保样本孔达到显色的峰值。

6. 使用正确的终止液,并在加入终止液后立即读数。

7. 检查显色剂的保存条件,确保其未被氧化。

8. 核对酶标仪的设置,确保波长和滤光片选择正确,并考虑仪器校准。

9. 如果是新试剂或新操作,可以尝试对照标准品操作,看是否能重现显色,从而排除操作步骤中的问题。

通过上述步骤,可以排查并解决样本不显色的问题。