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在细胞复苏过程中,冻存管是指用于长期保存细胞的专用玻璃或塑料管。细胞复苏是将冷冻保存的细胞从“休眠"状态恢复到正常生长状态的过程。在这个过程中,解冻的速度至关重要,因为缓慢解冻可能导致细胞内水分重新结晶,造成机械损伤,影响细胞活力和功能 。
具体来说,快速融化可以确保细胞外的冰晶在很短的时间内即融化,避免水分渗入细胞内部并再次结晶。这样做有以下几点好处:
1、避免冰晶再结晶:
缓慢融化时,细胞外冰晶会逐渐融化并渗入细胞内部,形成更大的冰晶结构,导致细胞膜破裂和DNA损伤。快速融化(1-2分钟内)可使冰晶在细胞内外同步快速融化,减少再结晶风险。
2、保护细胞渗透压平衡:
快速升温能缩短细胞暴露在高浓度电解质溶液中的时间,防止渗透压剧烈变化引起的细胞脱水或膨胀。
3、避免DMSO毒害:
在复苏过程中,使用的保护剂如DMSO在常温下对细胞具有一定的毒副作用,因此必须在1-2分钟内使冻存液wanquan融化,以减少DMSO对细胞的毒性。
4、操作安全:
快速融化减少了细胞暴露在室温下的时间,降低了由于温度变化对细胞的不利影响,同时也有助于减少实验中的操作时间,提高效率。
5、操作规范与注意事项:
水浴锅使用:需预热至37℃,冻存管需全部浸入水面以下并持续摇晃,确保受热均匀。
安全防护:冻存管可能因温差爆炸,操作时需佩戴护目镜和防冻手套。
6、建议:
l 复苏操作应在超净台中进行,确保无菌环境。
l 融化后应尽快进行离心和换液,避免DMSO长时间接触细胞。
l 观察细胞贴壁情况和活性,通常在复苏后24–48小时内换液,避免过早干扰细胞恢复。
综上所述,细胞复苏时快速融化冻存管是为了保护细胞免受冰晶伤害和DMSO的毒害,确保细胞能够迅速恢复生长状态。