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解答:ELISA试验时稀释工作的必要性
点击次数:654 更新时间:2018-12-17
   在进行ELISA试验时,我们需要将ELISA实验的样本进行稀释工作,这时就会有人来问,为什么ELISA实验的样本都要进行稀释工作,接下来小编就为大家解答一下。
  原因一:竞赛抑制比较显着,应稀释竞赛物;
  原因二:以下降非特异性反响,使特异性的抗原抗体反响充分体现出来。血清稀释用一般的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,当然假如你嫌费事我觉得用生理盐水代替PBS关系也不大。不论你是用直接竞赛仍是直接竞赛,血清的稀释倍数肯定要事前断定,但也不必一点点,你做一个预试验即可,挑选OD在1.0左右的稀释倍数,即你的竞赛ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较敏感。
  ELISA试剂盒试验稀释血清的过程:
  先把蛋白稀释必定的倍数,比如说10倍、20倍稀释(这样能够大体断定一个参数),将抗原进行一系列稀释包被微量反响板,再用必定稀释度的阳性参阅血清和阴性参阅血清进行孵育后洗刷,再加酶结合物进行反响,经孵育洗刷后,加底物溶液显色,停止反响后别离测定O.D值,挑选O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为zui适包被浓度。一般总是要挑选那个O.D值稍大于1.0,而不挑选小于1.0的抗原浓度。阴性参阅血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参阅血清和阴性参阅血清的O.D值有显着不同。
  除此之外,ELISA试验中还会遇到各种各样的问题,作为实验者需要及时找出处理的方法,包括:
  1、洗板:1)采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉;2)反应板过多造成洗板等待时间长;
  3)采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
  解决方法:1)保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;2)合理安排,或多用几台洗板机。
  2、显色:1)加显色剂时溅出孔外造成液体回流;2)显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂。
  解决方法:1)加样时保持显色剂不外流;2)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
  3、终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
  4、读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。