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检测试剂盒为何会出现错误的实验结果
点击次数:619 更新时间:2019-04-23
  检测试剂盒为何会出现错误的实验结果
  检测试剂盒以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种高敏感性的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
  应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。
  检测试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品的浓度。
  检测试剂盒分为内源性物质和外源性物质两种:
  1.内源性物质
  普遍认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:补体、嗜异性抗体等。
  (1)补体
  检测试剂盒中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。解决的办法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
  (2)嗜异性抗体
  人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。
  2.外源性物质
  外源性物质常常是由于用于检测试剂盒的血标本的采集、贮存不当等原因所致。如标本溶血、标本被细菌污染等。
  (1)标本溶血
  由于各种人为原因引起的标本溶血,均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。为克服上述干扰,标本采集时必须注意避免溶血。
  (2)标本受细菌污染
  因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本和溶血标本一样,可产生非特异性显色干扰测定结果。