染料法PCR试剂盒的使用注意事项及操作条件的选择说明
点击次数:750 更新时间:2019-11-20
染料法PCR试剂盒的使用注意事项及操作条件的选择说明
染料法PCR试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
染料法PCR试剂盒的使用注意事项:
1、染料法PCR试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定,计算时请乘以总稀释倍数。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、染料法PCR试剂盒的底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
在进行染料法PCR试剂盒实验时,各项条件的选择也是非常重要的:
1、固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚苯乙烯、纤维素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不论使用哪一种载体,在使用前进行筛选:在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应的均一性如何,以此来判断其吸附性能是否良好。
2、包被抗体的选择:将抗体吸附在固相载体表面的时候,一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度,进行包被后,当其它试验条件大致一样的情况下,观察阳性标本的OD值。选择蛋白量少,OD值大的浓度。