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一文轻松学会如何使用RT-PCR试剂盒
点击次数:5758 更新时间:2020-04-03
  RT-PCR试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定,易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检。
  下面小编要为大家介绍的是RT-PCR试剂盒详细操作规程:
  1、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
  2、空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。
  3、标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的后一个点)。
  4、样品孔:加入样品50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl。
  5、轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  6、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
  7、次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  8、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  9、第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
  11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  12、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度,测定应在加终止液后10分钟以内进行。
  13、计算:ADP试剂盒;RT-PCR试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线。