一文轻松学会如何使用RT-PCR试剂盒
点击次数：5947 更新时间：2020-04-03
RT-PCR试剂盒是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定，易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检。
下面小编要为大家介绍的是RT-PCR试剂盒详细操作规程：
1、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
2、空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
3、标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做，并将其作为标曲的后一个点)。
4、样品孔：加入样品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
6、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
7、次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
8、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
9、第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
10、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
11、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。
12、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度，测定应在加终止液后10分钟以内进行。
13、计算：ADP试剂盒；RT-PCR试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线。
