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浅述如何辨别荧光定量PCR试剂盒的好坏
点击次数:592 更新时间:2020-05-21
  荧光定量PCR试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测肌肉组织、牛奶等样品中的地塞米松,试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样品溶液,样本中的地塞米松药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗地塞米松药物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含地塞米松药物含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中地塞米松药物的残留量。
  荧光定量PCR试剂盒可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液、分泌物和排泄物等均可作标本,以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定,有些则需经预处理。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
  荧光定量PCR试剂盒辨别好坏的方法:
  1、可采用已知浓度的重组细胞因子,稀释到检测范围内作为样本加入,看检测的准确性。
  2、选定一个检测范围内的浓度做多孔重复,可看出平行性好不好。即板内CV值的大小,此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说,板间CV值是较大的。
  3、如果有相同指标的荧光定量PCR试剂盒,可用对方的标准品作为样本,分别加入各自的试剂盒做检测,以检测试剂盒的真实性,准确性。如其中一种是的,比较可靠的话,可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。
  4、对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的zui小浓度稀释,可测出灵敏度,建议5个复孔以上才有意义。一般以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述,也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。