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通用PCR试剂盒无需常规核酸提取即可进行检测
点击次数:494 更新时间:2021-04-14
  通用PCR试剂盒指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了变革。
  在实时荧光定量PCR中,反应以循环中检测到目标扩增的时间点为特征,而非在一定循环数后目标分子素计的扩增量。目标核酸的起始拷贝数越高,则会越快观察到荧光的显著增加。相反,终点法检测(也称“读板检测”)测量的是PCR循环结束时素计的PCR产物量。
  通用PCR试剂盒无需常规核酸提取,仅需对样品进行简单研磨、离心处理,即可开始后续核酸检测。在保证检测结果准确可靠的前提下,简化了检测步骤,将检测时间缩短至不到1小时,成为适合于屠宰场、养殖场的技术。
  通用PCR试剂盒“变性-退火-延伸”三个步骤的实现方法是:
  1、变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,为下轮反应作准备;
  2、退火:退火也叫复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,在这个温度下,模板DNA单链能够与引物的互补序列配对结合;所谓引物,是一段已经确定好的DNA的片段,通过引物找到模板DNA的相应位置,也就是确定了复制的起点;
  3、延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按照碱基互补配对原则和半保留复制原理,就能合成一条新的与模板DNA链互补的复制链。
  希望上述内容能够帮助大家更好的了解本试剂盒。