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荧光定量PCR试剂盒的样本处理及要求介绍
点击次数:535 更新时间:2021-07-19
  荧光定量PCR试剂盒是把RNA合成cDNA,然后再对此cDNA进行扩增的试剂盒。RNA的纯度会影响cDNA的合成量,而制备RNA的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。
  往预先包被犬硫酸类肝素(HS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的犬硫酸类肝素(HS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  下面要为您介绍的是荧光定量PCR试剂盒的样本处理及要求:
  1、血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8C1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  3、组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。再将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
  4、细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  希望上述内容能够帮助大家更好的了解本产品。