T4 GP59 Loader protein公司正在出售的产品:大鼠肝癌细胞系 溶质载体家族22成员18样蛋白封闭多肽 埃可病毒PCR检测试剂盒 大鼠维生D3(VD3)ELISA Kit 土壤木质过氧化物(SLiP)活性比色法检测试剂盒 天山中慢生根瘤菌 脑发育同源蛋白1抗体
更新时间:2024-01-14
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-PJ1141 | T4 GP59 Loader protein | 100 ug |
描述:
T4 噬菌体复制分为依赖于起始子的起始复制和依赖于重组酶的复制。由起始复制产生的 3’-ssDNA 作为重组复制的第一步链侵入的组份,该 3’-ssDNA 被 T4 gp32蛋白所覆盖,同时将 T4 UvsY 募集到此;T4 UvsY 作为T4 UvsX 的 loader 将其运载至此,于此同时 gp32 被置换下来, UvsX 和 UvsY 形成突触结构, 然后侵入同源的双链形成 D-Loop, 一旦形成 D-Loop, UvsX 即被置换下来。D-loop 被置换链作为滞后链合成的模板,很快被gp32 结合。随后, 解旋酶 loader gp59 与 gp32 覆盖的DNA 复制叉结合,将 gp41/61 运载至此, gp61 蛋白合成引物片段促进滞后链上 DNA 的合成,而 gp41 通过解旋模板而促进先导链的 DNA 合成。最后,聚合酶的滑板蛋白 gp45 和其 loder 蛋白 gp44/62 与先导链相结合,促进聚合酶 gp43 的组装,gp45 将 gp43 运载至复制叉处后启动先导链和滞后链的合成,gp44/62 随后从复制叉处解离。因此, gp59 作为解旋酶 gp41 的 loader 在 gp41 引导的 DNA 先导链合成中起到重要作用。
储存:-20℃。
Storage Buffer:
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25% Glycerol
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
公司正在出售的产品:
洋葱伯克氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | α辅肌动蛋白3ELISA试剂盒 ACTN-3免费代测试剂 | 人腺病毒B77型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
查菲埃立克体PCR检测试剂盒说明书 | 低密度脂蛋白受体相关蛋白2ELISA试剂盒 LRP2免费代测试剂 | 星状诺卡菌PCR检测试剂盒直销 |
鸭源性成分Co基因(Duck-Co)检测试剂盒 | 胞浆抗蛋白水解3ELISA试剂盒 | 绿脓假单胞菌PCR检测试剂盒 |
马疱疹病毒4型PCR检测试剂盒 | 淀粉αELISA试剂盒 | 麻风分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
孟氏尖旋线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移14ELISA试剂盒 | 肠道腺病毒41型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
诺沃克病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 二-N-乙酰壳二糖ELISA试剂盒 | 乳杆菌(LB)核检测试剂盒 |
诺如病毒型PCR检测试剂盒 | 泛核蛋白2ELISA试剂盒 | 禽疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
美洲四棱线虫PCR检测试剂盒 | 芳基硫酯HELISA试剂盒 | 狂犬病毒PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
梅毒螺旋体梅毒亚种PCR检测试剂盒 | 防御β136ELISA试剂盒 | 平尾毛细线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
牛支原体(MYPB)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法) | 封闭蛋白15ELISA试剂盒 | 螺杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
卵形疟原虫核检测试剂盒 | 人程序性死亡-1(PD-1)ELISA试剂盒 | 病毒H5亚型PCR检测试剂盒 (荧光PCR法) |
脑心肌炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 人维生D受体(VDR)检测试剂盒elisa | 猪嗜血杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马腺病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 | T4 GP59 Loader protein人白介1受体相关激1(IRAK1)试剂盒ELISA | 猪霍乱沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
差异支原体PCR检测试剂盒 | 人癌基因蛋白质p190/bcr-abl ELISA检测试剂盒 | 马乳头瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
麦ubiquitine 基因核检测试剂盒 | 人单丝氨蛋白激1(LIMK1)试剂盒ELISA | 禽疱疹病毒通用PCR检测试剂盒 |