平板涂布玻璃珠(无菌)公司正在出售的产品:耐长春新碱胃腺癌细胞 FAM118A蛋白封闭多肽 鹅包柔氏螺旋体PCR检测试剂盒 大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA Kit 果胶裂解活性比色法检测试剂盒 海岸海洋球菌 环指蛋白190抗体
更新时间:2024-01-12
商品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
平板涂布玻璃珠(无菌) | 1000粒 | A-Hc2237 |
保存条件:室温干燥保存
产品介绍:
平板涂布玻璃珠提供了一种高效快速的菌液(大肠杆菌、酵母菌液等)涂布方法。平板涂布玻璃珠(直径4 mm)光滑均匀,无菌包装,表面经特殊工艺处理,不残留菌液。与传统方法比较,使用平板涂布玻璃珠,菌液涂布更加均匀,并能够覆盖传统涂菌方法不能达到的平板边缘。同时,可实现多板同时涂布,大大提高实验效率。平板涂布玻璃珠可经反复灭菌,多次使用。
特点:
1. 均匀:菌液涂布均匀。
2. 高效:可实现多板同时涂布。
3. 经济:可反复灭菌,多次使用。
灭菌方法:
玻璃珠经70%的乙醇洗涤后,高温高压灭菌,晾干后使用。
使用方法:
1. 向已加入菌液的固体琼脂平板加入无菌玻璃珠数颗,如9 cm平板每板建议加10粒玻璃珠。
2. 盖好板盖,于超净台表面水平前后、左右各快速晃动平板约10 sec,以达到更佳涂板效果。
注意:当板盖有冷凝水时,应倒掉或晾干板盖上的冷凝水,以防止涂板时污染平板。如需同时涂布多板,可将加有玻璃珠的平板叠在一起,同时晃动涂板。
3. 待琼脂表面菌液干燥时,倒出玻璃珠,盖好板盖,以备后续培养。
注意:平板涂布玻璃珠为无菌包装,请在无菌环境下使用。玻璃珠可反复灭菌,多次使用。
PCR基本步骤及注意事项?
一、实验原理
PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法,它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而体外PCR反应同样需要类似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列,实现对特定位置的扩增;PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境;反应过程同生物体内一样,DNA双链打开,引物结合模板,延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链,而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链,在退火温度处引物结合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子,进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。
在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应, 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
二、主要的成分
1.模板可以是多种形式,主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物,cDNA等,但不能为RNA。对于不同类型的模板,其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够,质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。
注意cDNA为单链DNA,但仍可做PCR的模板,只不过在第一轮循环时只有一个引物结合,合成另一条链。从第二轮开始,两个引物均与特异位点结合,从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增,原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶,只能特意识别DNA链。
2.对于模版的量来说,一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂,提取的浓度也往往比较大,为防止浓度过大对PCR造成影响,故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单,且提取浓度一般较低,则无需稀释。
PCR实验中应该注意的问题有哪些?
没有ct值
检测结果遇到没有Ct值情况,排查是否有以下问题:
1、循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);
2、PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;
3、引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;
4、模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可), 对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,应考虑样本准备中杂质的引入及反复冻融的情况,建议将模板样本小量分装储备,避免反复冻融;
5、引物探针是否合适(尤其是引物跨越内含子,以确保扩增基因组DNA;上下游引物Tm值超过4℃以上也会影响扩增)。
ct值过晚
在相对定量中, Ct值一般控制在15—25之间比较好,如果在绝对定量中, 对低拷贝数的样品,Ct值会增大, 但是一般不宜超过40循环, 否则定量不准确。
因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情况, 需要根据具体实验设计和目的进行。
1、扩增效率低。引物之间或者引物和探针的比例不合适, 需要进行优化;引物或探针设计不合理, 需要重新设计;
2、PCR程序不合适, 改用三步法进行反应, 或者优化退火/延伸温度, 可以适当降低退火温度; 退火/延伸时间短(可以在推荐的时间条件下延长10s);
3、MgCl2浓度不合适,增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足;
4、PCR产物太长。PCR产物设计超过500bp;
5、模板中存在抑制物。用高纯度模板进行PCR检测或将模板进行稀释。
公司正在出售的产品:
拟无枝菌菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 超磷化微管相关蛋白tauELISA试剂盒 hyper phosphorylated MAPT免费代测试剂 | 眼蜱通用染料法荧光定量PCR试剂盒 |
纤维单胞菌通用PCR检测试剂盒供应 | 成纤维细胞生长因子受体4ELISA试剂盒 FGFR4免费代测试剂 | 拉沙热病毒PCR检测试剂盒供应 |
转基因植物Bt基因PCR检测试剂盒 | CTD磷1ELISA试剂盒 | 毛霉属通用PCR检测试剂盒 |
单纯疱疹病毒II型PCR检测试剂盒 | 丛状蛋白B3ELISA试剂盒 | 毛霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马动脉炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 蛋白二硫化物异构A3ELISA试剂盒 | 登革病毒1型和2型PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
禽副粘病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 蛋白磷1调控/抑制因子亚基1AELISA试剂盒 | 高致病性H7亚型病毒核检测试剂盒 |
病毒H9亚型PCR检测试剂盒 | 电子转移黄蛋白α肽ELISA试剂盒 | 彭氏变形菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | 毒蕈碱型受体M4ELISA试剂盒 | 流行性乙型脑炎病毒核检测试剂盒 |
麻疹病毒(MV)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法) | 多免疫球蛋白受体ELISA试剂盒 | 捻转血矛线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
禽结核分枝杆菌PCR检测试剂盒 | 二羰基/L-糖还原ELISA试剂盒 | 猫衣原体PCR检测试剂盒 |
莱菔子染料法PCR鉴定试剂盒 | 人钙蛋白抑制蛋白(CAST)检测试剂盒elisa | 诺如病毒GⅠ/GⅡPCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
派琴虫通用PCR检测试剂盒说明书 | 人丝氨蛋白抑制因子肽抑制因子进化枝3G(Serpina3g)试剂盒ELISA | 草果染料法PCR鉴定试剂盒 |
爱德华氏菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 人蛋白ATP1B4(ATP1B4)ELISA试剂盒 | 牙龈卟啉单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马立克氏病病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 人T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒 | 平板涂布玻璃珠(无菌)点状古柏线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
病毒通用型(AIV-U)核检测试剂盒 | 人补体1抑制物抗体-IgG(C1INH-IgG)ELISA试剂盒 | 皮里陶病毒PCR检测试剂盒 |