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T4 DNA Ligase(T4连接酶)

简要描述:

T4 DNA Ligase(T4连接酶)公司正在出售的产品:大鼠胰岛瘤细胞 γ-谷氨酰基环转移封闭多肽 支气管败血波氏杆菌PCR检测试剂盒 大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒 谷胱S转移(GST)活性比色法检测试剂盒 热阳光南极杆菌 胱抑9/半胱氨蛋白抑制剂9抗体

更新时间:2024-01-12

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T4 DNA Ligase(T4连接酶)

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

产品名称

规格

A-Hc2231

T4 DNA LigaseT4连接酶)

500U

浓    度: 5U/μl
产品概述:
在有Mg2+和ATP存在的条件下,T4 DNA Ligase能催化双链 DNA或RNA上相邻的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻,但不能催化单链 DNA 之间的连接。
保存条件:-20℃保存。
酶储存缓冲液:
10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ,50mM KCl,1mM DTT, 0.1mM EDTA,50% (v/v) glycerol。
5 × T4 DNA Ligase Buffer
250 mMTris-HCl (pH 7.5), 50mM MgCl2,50mM DTT, 5mM ATP,连接促进剂。
来     源:纯化于携带T4 DNA ligase 基因 的E. coli 菌株。
抑制剂和热失活:
大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性。65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。
单位定义:
在37℃,20分钟内交换1 nmole 的32PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中,16℃条件下,30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。
质量控制:
蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出;SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。6.png


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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的产品:

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巢蛋白1ELISA试剂盒 NID1免费代测试剂

问号钩端螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒

山羊疱疹病毒2PCR检测试剂盒说明书

成神经细胞瘤抑制瘤变蛋白1ELISA试剂盒 NBL1免费代测试剂

金氏金氏菌PCR检测试剂盒供应

猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒

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蛋白O-甘露糖基转移2ELISA试剂盒

鹦鹉热嗜衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒

禽腱鞘炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

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马炎病毒PCR检测试剂盒

动力蛋白激活蛋白4ELISA试剂盒

龙眼肉染料法PCR鉴定试剂盒

绿脓假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

多聚ADP核糖聚合4ELISA试剂盒

拟枝孢镰刀菌PCR检测试剂盒说明书

禽类支原体通用PCR检测试剂盒

二肽基肽3ELISA试剂盒

猫支原体PCR检测试剂盒

蜡样杆菌PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

人钙结合蛋白S100A14 ELISA试剂盒

诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒

佩氏着色霉PCR检测试剂盒供应

B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA检测试剂盒

蒺藜探针法PCR鉴定试剂盒

埃可病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

T4 DNA LigaseT4连接酶)人蛋白精氨甲基转移1(PRMT1)试剂盒ELISA

猪萨佩罗病毒PCR检测试剂盒

曼氏杆菌通用PCR检测试剂盒PCR检测试剂盒

Traf2结合蛋白(T2BP)试剂盒ELISA

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人波形蛋白(VIM)试剂盒 ELISA

疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒