ELISA实验中的“室温"通常指18-25℃（部分标准为20-25℃），是试剂预处理、样本反应及部分孵育步骤的关键环境条件。温度波动会直接影响抗原抗体结合效率、酶活性及反应动力学，导致信号强度差异（如±1℃温差可能引起10%以上的吸光度偏差），最终影响结果准确性和重复性。以下是一些确保室温稳定的方法：

一、实验环境控制‌

使用恒温实验室或空调系统，维持室温20-25℃（允许波动±1℃），避免靠近窗户或空调出风口。

冬季湿度需>30%，夏季避免阳光直射反应板，防止局部温度差异。

二、使用恒温箱：

如果实验需要特定的温度，如37℃，可以使用恒温箱来维持稳定的温度。将ELISA板放置在湿盒内，湿盒底部垫湿纱布，确保温度均匀分布。使用鼓风恒温箱时，应在酶标板上方贴封纸，以防蒸发。

三、‌温育设备校准‌

孵育箱/水浴需定期校准，确保37℃±0.5℃的均匀性，反应板置于中央避免边缘孔温度偏差。

湿盒法温育时，金属湿盒需预温至目标温度，板底贴水面并加盖防蒸发。

四、‌试剂与样本平衡‌

试剂盒和样本需提前30分钟置于实验台平衡，避免冷凝影响浓度。

标准品现用现配，平衡后立即使用，避免长时间暴露。

五、‌操作细节优化‌

加样时使用预温枪头，减少液体温度差异。

显色反应时间严格控制在5-15分钟内，避免室温波动延长反应时间。

六、遵循说明书

严格按照试剂盒说明书的要求操作，包括温度控制。如果说明书指定了特定的温度和时间，务必遵守。

通过上述方法，可以有效地控制和稳定ELISA实验中的室温，从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌