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ELISA试剂盒的使用简单而又不简单
点击次数:610 更新时间:2019-03-21
  ELISA试剂盒的使用简单而又不简单
  elisa试剂盒是一种敏感性高,重复性好,特异性强的实验诊断方法。因为它试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,在免疫学检验的各领域中已经得到了广泛的使用。
  在进行ELISA试剂盒实验时,各项条件的选择也是非常重要的:
  (1)、固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚苯乙烯、纤维素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不论使用哪一种载体,在使用前进行筛选:在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应的均一性如何,以此来判断其吸附性能是否良好。
  (2)、包被抗体的选择:将抗体吸附在固相载体表面的时候,一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度,进行包被后,当其它试验条件大致一样的情况下,观察阳性标本的OD值。选择蛋白量少,OD值大的浓度。
  (3)、酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法”在正式实验系统里准确地滴定浓度。
  (4)、ELISA试剂盒后还有酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、而本身无色。在进行试验时要注意号防护措施,因为有些供氢体有可能存在着的致癌作用。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体。等底物作用了一段时间后,加入强酸碱的物质终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制。