核酸外切酶I(E.coli)公司正在出售的产品:小鼠杂交瘤细胞 破伤风毒重链封闭多肽 克罗诺杆菌通用PCR检测试剂盒 大鼠糖皮质激受体α(GR-α)ELISA检测试剂盒 糖原合成(GCS)活性比色法检测试剂盒 斯氏鲁杰氏菌 胰羧肽A6抗体
更新时间:2024-01-14
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-PJ1115 | 核酸外切酶I(E.coli) | 1500U |
A-PJ1115 | 核酸外切酶I(E.coli) | 15KU |
该酶具有从 3’-5’ 方向降解单链 DNA 的外切酶活性,能够逐步释放脱氧核糖核酸 5'单磷酸,并留下完整的 5'端二核苷酸。该酶来源于携带有 E. coli exo I 基因的质粒,经重组表达纯化而得。该酶多用于 PCR 扩增后降解消化引物,该酶对于双链 DNA 和磷酰或乙酰基团封闭的 3’OH 末端 DNA 链无活性。
应用
从 PCR 混合物中去除引物PCR 产物测序之前用于在单管中使用大引物进行的PCR 诱变反应从核酸混合物中去除含有 3'羟基末端的单链 DNA检测含有 3'羟基末端的单链 DNA 的存在
储存:-20℃可保存 3 年。
活性定义:1 单位指在 37°C 条件下,30 分钟内催化释放10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。
使用注意事项
(1)1×ExoI Buffer:67mM Glycine-KOH pH 9.5,6.7mMMgCl2,10mM 2-巯基yi醇。该酶在常规 PCR Buffer 中也具有活性。
(2)该酶的最佳反应温度为 37°C,80°C 20min 可失活。
(3)该酶不能切割双链 DNA,因此含有二级结构的单链DNA 需要变性后才能消化。
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
公司正在出售的产品:
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人肤蝇PCR检测试剂盒供应 | 蛋白酪氨磷受体BELISA试剂盒 PTPRB免费代测试剂 | 呼吸道15种病毒PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
呼吸道合胞病毒B 型(RSV-B)核检测试剂盒 | 细胞色b-245β肽ELISA试剂盒 | 马媾疫锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
蜡样杆菌sleL基因(110bp)常规PCR检测试剂盒 | 刀豆AELISA试剂盒 | 马杜拉分枝菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
猫衣原体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 短蛋白聚糖ELISA试剂盒 | 耐久肠球菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
皮炎外瓶霉探针法荧光定量PCR试剂盒 | 多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移3ELISA试剂盒 | C型产气荚膜杆菌(CP-C)核检测试剂盒 |
皮炎芽生菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 二氢二醇脱氢2ELISA试剂盒 | 禽传染性支气管炎病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
猫血支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 | 泛醌蛋白1ELISA试剂盒 | 蓝氏贾第鞭毛虫B型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
猫疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 防御α3ELISA试剂盒 | 女贞子染料法PCR鉴定试剂盒 |
诺氏梭状杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 分拣连接蛋白16ELISA试剂盒 | 马传染性贫血(EIAV)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法) |
流感嗜血杆菌型PCR检测试剂盒直销 | 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡ-Ab)试剂盒ELISA | 禽副粘病毒2型PCR检测试剂盒说明书 |
凝固阴性葡萄球菌核检测试剂盒 | 人抗着丝点抗体(ACA/CENP)elisa试剂盒 | 柏氏血矛线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 |
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