DNA Marker 2000 plus公司正在出售的产品:分泌A2抗体B淋巴细胞 脂质运载蛋白相互作用膜受体蛋白封闭多肽 麦芽香肉杆菌PCR检测试剂盒 大鼠绒毛膜促性腺激(CG)ELISA Kit 麦芽糖含量活性比色法检测试剂盒 脱色芽孢杆菌 肌细胞增强因子2B抗体
更新时间:2024-01-12
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-PJ1066 | DNA Marker 2000 plus | 250μl |
A-PJ1066 | DNA Marker 2000 plus | 250μl×10 |
DNA Marker 2000 是由 6 条带状双链 DNA 条带组成, 分别为:100、250、500、750、1000 和 2000 bp,每条带 浓度大约为 20 ng/μl;适用于琼脂糖凝胶电泳中 DNA 条带 的分析。本产品为即用型产品,已含有 loading Buffer,可 根据试验需要,直接取 5 μl 进行电泳,使用方便,条带清晰。
包装
应用:适用于衡量 100-2000bp 之间 PCR 片段的大小。
储存液组分:
10mM Tris-HCl(pH8.4)
10mM EDTA
0.02%溴酚蓝
5%甘油
储存:-20℃可保存 2 年,避免反复冻融。
使用方法
1.取 5 μl 本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每 1mm 加样孔宽度加 1μl,如加样孔较宽,可适当增加上样量)进行电泳。
2.建议浓度为 1.5%-2%的琼脂糖凝胶,电泳电压为 4-10v/cm,电泳时间为 30-40 分钟。
3.通过 EB 染色,在紫外灯下观察电泳条带。
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
公司正在出售的产品:
幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)染料法荧光定量PCR试剂盒 | 瘢痕性天疱疮抗体ELISA试剂盒 CP免费代测试剂 | 人疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
点状古柏线虫PCR检测试剂盒供应 | 单酰甘油-O-酰基转移3ELISA试剂盒 MOGAT3免费代测试剂 | 发酵支原体PCR检测试剂盒直销 |
马传染性贫血(EIAV)核检测试剂盒 | 细胞周期L2ELISA试剂盒 | 马皮疽组织胞浆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
坏死梭杆菌PCR检测试剂盒 | 蛋白C抑制因子ELISA试剂盒 | 马生殖泰勒氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马生殖泰勒氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 地松诱导蛋白ELISA试剂盒 | 脑多头囊虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
腔阔盘吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 动力蛋白激活蛋白4ELISA试剂盒 | 鼻疽伯克霍尔德菌(BM)核检测试剂盒 |
侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒 | 多聚ADP核糖聚合4ELISA试剂盒 | 腔阔盘吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒 |
马皮疽组织胞浆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 多药耐药相关蛋白ELISA试剂盒 | 镰刀疟原虫(恶性疟原虫)探针法荧光定量PCR试剂盒 |
马疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 二肽2ELISA试剂盒 | 牛腺病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
气肿疽梭状杆菌PCR检测试剂盒 | 防御β118ELISA试剂盒 | 马疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
镰刀疟原虫恶性疟原虫PCR检测试剂盒供应 | 人丁酰酯(BCHE)试剂盒ELISA | 气肿疽梭状杆菌PCR检测试剂盒 |
牛腺病毒3型 探针法荧光定量PCR 试剂盒 | 人蛋白3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)elisa试剂盒 | 蓝氏贾第鞭毛虫A型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
肠杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒(暂停) | DNA Marker 2000 plus人层粘连蛋白-5(LN-5)ELISA检测试剂盒 | 鹌鹑支气管炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
小鼠肝炎病毒PCR检测试剂盒 | 人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)试剂盒ELISA | 鸭肠炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
传染性造血器官坏死病毒(IHNV)核检测试剂盒 | 人成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA试剂盒 | 侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒 |