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DNA Marker 2000 plus

简要描述:

DNA Marker 2000 plus公司正在出售的产品:分泌A2抗体B淋巴细胞 脂质运载蛋白相互作用膜受体蛋白封闭多肽 麦芽香肉杆菌PCR检测试剂盒 大鼠绒毛膜促性腺激(CG)ELISA Kit 麦芽糖含量活性比色法检测试剂盒 脱色芽孢杆菌 肌细胞增强因子2B抗体

更新时间:2024-01-12

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DNA Marker 2000 plus

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

产品名称

规格

A-PJ1066

DNA Marker 2000 plus

250μl

A-PJ1066

DNA Marker 2000 plus

250μl×10

DNA Marker 2000 是由 6 条带状双链 DNA 条带组成, 分别为:100、250、500、750、1000 和 2000 bp,每条带 浓度大约为 20 ng/μl;适用于琼脂糖凝胶电泳中 DNA 条带 的分析。本产品为即用型产品,已含有 loading Buffer,可 根据试验需要,直接取 5 μl 进行电泳,使用方便,条带清晰。

包装


应用:适用于衡量 100-2000bp 之间 PCR 片段的大小。
储存液组分:
10mM Tris-HCl(pH8.4)
10mM EDTA
0.02%溴酚蓝
5%甘油
储存:-20℃可保存 2 年,避免反复冻融。
使用方法
1.取 5 μl 本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每 1mm 加样孔宽度加 1μl,如加样孔较宽,可适当增加上样量)进行电泳。
2.建议浓度为 1.5%-2%的琼脂糖凝胶,电泳电压为 4-10v/cm,电泳时间为 30-40 分钟。
3.通过 EB 染色,在紫外灯下观察电泳条带。

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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的产品:

幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)染料法荧光定量PCR试剂盒

瘢痕性天疱疮抗体ELISA试剂盒 CP免费代测试剂

人疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒

点状古柏线虫PCR检测试剂盒供应

单酰甘油-O-酰基转移3ELISA试剂盒 MOGAT3免费代测试剂

发酵支原体PCR检测试剂盒直销

马传染性贫血(EIAV)核检测试剂盒

细胞周期L2ELISA试剂盒

马皮疽组织胞浆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

坏死梭杆菌PCR检测试剂盒

蛋白C抑制因子ELISA试剂盒

马生殖泰勒氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒

马生殖泰勒氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒

地松诱导蛋白ELISA试剂盒

脑多头囊虫探针法荧光定量PCR试剂盒

腔阔盘吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒

动力蛋白激活蛋白4ELISA试剂盒

鼻疽伯克霍尔德菌(BM)核检测试剂盒

侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒

多聚ADP核糖聚合4ELISA试剂盒

腔阔盘吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒

马皮疽组织胞浆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

多药耐药相关蛋白ELISA试剂盒

镰刀疟原虫(恶性疟原虫)探针法荧光定量PCR试剂盒

马疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒

二肽2ELISA试剂盒

牛腺病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒

气肿疽梭状杆菌PCR检测试剂盒

防御β118ELISA试剂盒

马疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒

镰刀疟原虫恶性疟原虫PCR检测试剂盒供应

人丁酰酯(BCHE)试剂盒ELISA

气肿疽梭状杆菌PCR检测试剂盒

牛腺病毒3型 探针法荧光定量PCR 试剂盒

人蛋白3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)elisa试剂盒

蓝氏贾第鞭毛虫A型探针法荧光定量PCR试剂盒

肠杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒(暂停)

DNA Marker 2000 plus人层粘连蛋白-5(LN-5)ELISA检测试剂盒

鹌鹑支气管炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

小鼠肝炎病毒PCR检测试剂盒

β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)试剂盒ELISA

鸭肠炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

传染性造血器官坏死病毒(IHNV)核检测试剂盒

人成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA试剂盒

侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒