TRzol（总 RNA 提取试剂）( 红 )

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

产品介绍：TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。

无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够做RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外转录、RNA酶保护分析和分子克隆。

TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA通过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙锭染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5kb (28S)和~2kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA，5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A 260 /A 280 比值≥1.8。

产品储存：TRzol在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2-8℃的环境下。

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备？

试剂:
模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
设备：
PCR仪：用于控制反应温度，保证PCR反应时不同温度环节的严格控制；电泳槽：用于分离PCR扩增产物；核酸提取仪：从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是，只有在有序齐全的基础上，才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验：

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：

一、变性：

利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性：

在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸：

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化：

1、变性温度和时间：

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。

公司正在出售的产品：

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病毒基因组 DNA/RNA 快速提取试剂盒	季节性流感病毒 H1N1 亚型 HA 基因核酸检测试剂盒	乙醇含量测试盒（比色法）
RNAclean RNA 清洁纯化试剂盒	丙型流感病毒核酸检测试剂盒	乙醇脱氢酶（ADH）测试盒（比色法）
RNAfixer 无液氮 RNA 样品储存液	欧亚类禽猪流感病毒( EA-H1N1 )核酸检测试剂盒	甲醛脱氢酶（FDH）测试盒（比色法）
RNAsafe 高效 RNase 灭活剂	甲型流感病毒 / 乙型流感病毒核酸检测试剂盒	乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒（比色法）
RNAlong RNA 长期保存液	H7N9 亚型病毒核酸检测试剂盒 / 含内标	辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒（比色法）
RNase Away 即用型强力 RNase 灭活剂	季节性流感病毒 H3N2 亚型核酸检测试剂盒	NADP磷酸酶（NADPase）测试盒（比色法）