链霉亲和素磁珠

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

链霉亲和素磁珠是一种高度均匀的超顺磁性微球，表面包覆着高密度的超纯链霉亲和素（＞97%）。微球经过专门设计、测试和质量控制，可用于免疫沉淀、细胞分选、快速单步捕获生物su化分子，如 DNA、RNA、抗体或细胞裂解物或杂交反应中的蛋白质等。链霉亲和素（或抗生素多倍体）和生物su之间的相互作用表现出已知的最高非共价相互作用之一。抗生物su、链霉亲和素、单体抗生物su及其类似物已成为探针和亲和配体的有力工具，在生化分析、诊断、亲和纯化和药物传递等领域有着广泛的应用。链霉亲和素是一种四聚体生物su结合蛋白，源于链霉菌亲和素 II，质量为 60000 道尔顿。链霉亲和素不含碳水化合物，pI 较低，非特异性结合程度较低，使链霉亲和素成为许多检测系统的理想试剂选择。

产品特点: 使用链霉亲和素-生物su结合系统的优点和益处：

·亲和力：链霉亲和素是同源四聚体，具有较高的生物su结合亲和力，具有KD~10−14 米。

·高稳定性：生物su结合复合物具有优异的稳定性，可抵抗 pH、温度（2°C 和40°C）、苛刻的有机溶剂、变性剂（如氯化胍）、洗涤剂（如 SDS）和蛋白水解酶。

·突出的选择性和特异性：生物su和链霉亲和素的相互作用具有高度的特异性，确保了较低的非特异性结合。

·高灵敏度：高稳定性和特异性确保了高检测灵敏度。

·非常灵活：生物su的小尺寸和显著稳定性被证明非常适合相对容易地并入各种分子，例如合成聚合物、荧光团、小分子或生物分子中的特定位置，从而对共轭生物分子的结构和功能施加最小的扰动。

链霉亲和素磁性微球的优点：

·快速、简单且一步到位的高通量程序：消除了柱状物或过滤器，或重复费力的移液或 离心（图 1） ·高结合能力 ·表现出较低的非特异性结合 ·可扩展-可轻松调整样本大小和自动化

所需材料 ·

Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4 ·磁力分离器（适用于手动操作）： 根据实验时生物样品的体积，使用者可以选择以下不同型号的磁力分离器： 8孔磁力架 可以容纳8个单独的1.5-2.0 ml 离心管 ; 24孔磁力架可以容纳24个单独的1.5-2.0 ml离心管; 4孔磁力-15可以容纳 4个单独的15ml离心管; 4孔磁力架-50可以容纳四个单独的50 ml离心 管。

操作过程：

注: · 该方案是一种通用亲和纯化程序。为了获得最佳结果，每个用户应确定纯化单个目标蛋白的最佳工作条件。

·根据粗样品中目标生物su化分子的数量（基于珠子结合能力），优化每种应用中使用的珠子数量。使用过多的磁珠会导致背景较高，而使用过少的磁珠会导致产量较低。

1. 将最佳量的珠子转移到离心管中。将管放在磁力架上1-3分钟。在管留在分离器上的同时去除上清液。

2. 取下试管，用5倍体积的 1x Binding/Washing Buffer通过涡流清洗珠子30秒。将试管置于室温下1-3分钟。将管放在磁力架上1-3分钟。在管留在分离器上的同时去除上清液。

3. 重复步骤二两次。

向含有目标分子的粗样品中加入洗涤过的珠子，并在室温或所需温度下培养1-2小时（温度越低，培养时间越长）。

注: 强烈建议进行滴定以优化培养时间。更长时间的孵育可能导致更高的背景。

4. 如步骤 2 所述清洗磁珠，直到 280 nm 处洗脱液的吸光度接近背景水平（OD280<0.05）。

注: 添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂可降低非特异性背景。例如，向洗涤缓冲液中添加NaCl（高达1-1.5 M）、0.1-0.5%的非离子洗涤剂，如Triton X 100或吐温20。

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备？

试剂:
模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
设备：
PCR仪：用于控制反应温度，保证PCR反应时不同温度环节的严格控制；电泳槽：用于分离PCR扩增产物；核酸提取仪：从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是，只有在有序齐全的基础上，才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验：

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：

一、变性：

利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性：

在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸：

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化：

1、变性温度和时间：

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。

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