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NHS活化磁珠

简要描述:

NHS活化磁珠公司正在出售的产品:人子宫颈表皮癌细胞 麻疹病毒融合蛋白封闭多肽 禽白血病病毒亚群PCR检测试剂盒 大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒 半胱氨酰亚砜裂解(CSL)活性比色法检测试剂盒 茶褐斑拟盘多毛孢 RAS癌基因家族蛋白RAB40B抗体

更新时间:2024-01-12

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NHS活化磁珠

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

产品名称

规格

A-Hc2061

NHS活化磁珠

1ml30mg/ml

NHS-Activated Magnetic Beads 是均匀的,表面覆盖有高密度NHS(N-羟基琥珀 酰亚胺) 官能团的磁珠。磁珠通过形成稳定的酰胺键方式,快速、高效的共价结合任何含有伯胺的配 体(图 1)。本款磁珠可以在偶联条件下快速完成反应(室温 pH 6.5-9 下 15-30 分 钟,4℃ 下 4 小时),且不需要危险化学品。 NHS-activated Magnetic Beads 适于结合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推荐用于结合小肽分子, 因为其长臂(21-原子) 的亲水连接基团可以减少位阻现象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作为亲和树脂进行亲和纯化,将分子、 细胞和 部分细胞提取物进行提炼纯化。在与配体结合后,将磁珠添加到含有目标分子的样品中,然 后混合、孵育、洗涤和洗脱目标分子(图2)。


产品特点及优势:


·预活化即用型磁珠

·便于使用

·在pH7.4,4℃-25℃条件下可以快速偶联

·稳定的共价键,低水平的配体泄漏

·可重复使用的免疫亲和基质

·极低的非特异性结合率

·用途:用于纯化抗体,蛋白质/肽,DNA / RNA;细胞筛选、免疫沉淀

操作步骤


提示:

强烈建议在实验过程中进行滴定优化,以确定每个实验中应用的磁珠数量。该协议可以相应地放大和缩小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺类试剂的缓冲液,因为它们与预期的偶联反应竞争。

1.将适量的珠子转移到离心管中。将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀时, 去除上清液。 


2.取下试管,加入 5 倍磁珠溶液体积的 PBS 缓冲液,通过震荡重新悬浮磁珠,涡旋 30 秒。将试管至于室温环境 1-3 分钟,再将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀 时,去除上清液。 


3.重复步骤 2 两次。 


4.向含有目标蛋白质的粗样品中添加洗涤过的磁珠,并在室温或所需温度下温浴 1-2 小时 (温度越低,培养时间越长)。提示:强烈建议进行滴定实验以优化培养时间。因为孵化 的时间太长可能会导致很高的背景。 


5.用 5 倍磁珠体积的 PBS 缓冲液或 1M NaCl 清洗磁珠,直到 280nm 处洗脱液的吸 光度接近背景水平(OD 280<0.05)。提示:添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂也 可能会降低非特异性背景。例如,向洗涤缓冲液中添加 NaCl(浓度为 1-1.5 M)、0.1-0.5% 的非离子洗涤剂,如 TritonX-100 或 Tween-20,以及还原剂,如 DTT 或 TCEP(我们通 常使用 3mM)。 6.通过适当的方法,如低 pH(2-4)、高 pH(10-12)、高盐、高温、亲和洗脱或 SDS-PAGE 上样缓冲液中煮沸,洗脱目标蛋白。

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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的产品:

豚鼠疱疹病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

刀豆AELISA试剂盒 ConA免费代测试剂

弧菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

苍耳子染料法PCR鉴定试剂盒

补体片断4bELISA试剂盒 C4b免费代测试剂

人鼻病毒16PCR检测试剂盒供应

乙型肝炎病毒基因分型PCR测定试剂盒

CopineⅤ蛋白ELISA试剂盒

绵羊星状病毒通用PCR检测试剂盒

阿留申病毒PCR检测试剂盒

布皮质3ELISA试剂盒

绵羊星状病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

鹿源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

促胰液/分泌受体ELISA试剂盒

灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

青蟹双顺反子病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

单酰甘油-O-酰基转移3ELISA试剂盒

猪痢疾密螺旋体PCR检测试剂盒

曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

蛋白激C

牛皮蝇蛆染料法荧光定量PCR试剂盒

流行性造血器官坏死病毒PCR检测试剂盒

蛋白激活受体4ELISA试剂盒

骆驼种特异性基因PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

流感病毒H15亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

淀粉γELISA试剂盒

纳米小孢子菌PCR检测试剂盒直销

禽肾炎病毒型PCR检测试剂盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移10ELISA试剂盒

绵羊夏伯特线虫探针法荧光定量PCR试剂盒

口腔链球菌PCR检测试剂盒说明书

人谷胺转移2抗体(IgA)ELISA试剂盒

牛疱疹病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒

茄病镰刀菌PCR检测试剂盒

人瘦受体(LEPR)检测试剂盒elisa

吴茱萸染料法PCR鉴定试剂盒

枪状肝吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒

NHS活化磁珠人法尼醇X受体(FXR)试剂盒ELISA

镰刀疟原虫(恶性疟原虫)探针法荧光定量PCR试剂盒

钩端螺旋体通用探针法荧光定量PCR试剂盒

Q热科克斯体2(Q fever)抗体(IgM)试剂盒ELISA

杀蛎包拉米虫探针法荧光定量PCR试剂盒

玉米MS PCR检测试剂盒

人包虫抗体IgG ELISA试剂盒

牛乳头瘤病毒PCR检测试剂盒