PCR 产物纯化回收试剂盒 ( 磁珠法)公司正在出售的产品:小鼠黑色瘤细胞GFP荧光稳转株 干扰α2b封闭多肽 溶血隐秘杆菌PCR检测试剂盒 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)ELISA Kit β淀粉活性比色法检测试剂盒 大丽花轮枝孢(棉花黄萎病菌) RIT1蛋白抗体
更新时间:2024-01-12
保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍:
本试剂盒可将PCR产物中的 DNA 片段特异性地吸附到硅基化磁珠的表面,在磁场的作用下,携带 DNA 的磁珠向磁铁方法进行定向移动和聚集,与剩余的其它杂质分开。通过简单的两次洗涤,可以将杂质洗尽。最后用水或低盐缓冲液将结合在磁珠上的DNA 洗脱下来,纯化的DNA 可用于测序、酶切、标记和克隆等多种下游实验。该试剂盒可与核酸提取仪等工作站配套使用,可以简单、快速地进行大规模核酸提取,达到降低工作量和提高工作效率的目的。
产品特点:
1. 磁珠之间吸附量差异极小,可重复性好。
2. 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘钠和高氯酸盐,不影响后续下游实验。
3. 结合液为黄颜色,便于观察和监测 pH 值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-Hc2047 | PCR 产物纯化回收试剂盒 ( 磁珠法) | 100 次 |
A-Hc2047 | PCR 产物纯化回收试剂盒 ( 磁珠法) | 200 次 |
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
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