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rTEV蛋白酶

简要描述:

rTEV蛋白酶公司正在出售的产品:MEF抗性的小鼠胚胎成纤维细胞,经射线处理,P3,300万细胞 钙调节/钙调蛋白/钙调封闭多肽 棒杆菌通用PCR检测试剂盒 大鼠(CA)ELISA Kit 性木聚糖活性比色法检测试剂盒/性半纤维活性比色法检测试剂盒 小红卵菌 晶状体蛋白2抗体

更新时间:2024-01-14

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rTEV蛋白酶

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!

货号

产品名称

规格

A-PJ1111

rTEV蛋白酶

1000U

rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶,该酶特异性识别 Glu-Asn- Leu-Tyr -Phe-Gln-Gly七氨基酸序列,并高特异性、高活性剪切(剪切位点在Gln-Gly之间)。该酶经 6×His 标签纯化而得(含组氨标签),纯度达99%,剪切反应完毕后可通过 Ni-NTA Resin )去除。该酶在 4℃-30℃温度、pH 范围(6.0-8.5)反应条件下均具有活性(见下表)。

活性定义:在 1×rTEV Buffer(50 mM,pH8.0, 0.5 mM EDTA,1mM DTT),30℃反应 1h,剪切>85%的 3 μg 底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用:融合蛋白标签剪切去除。
储存:长期储存-70℃,可储存 2 年,-20℃可储存 6 个月。
操作方法
1. 在 EP 管中配制如下反应体系
融合蛋白 20 μg
20×rTEV Buffer 7.5 μl
0.1M DTT 1.5 μl
rTEV Protease 1-3 μl
ddH20 Up to 150 μl
2. 30℃孵育,在 1、2、4、6 小时分别吸出 30 μl 上述反应液,置于单独的 EP 管中。
3. 向上述 EP 管中加入 30 μl 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸 5 min,取 40 μl 进行SDS-PAGE 分析。
5. 如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于 4℃,请延长反应时间,并增加 rTEV 酶用量。6.png


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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?

试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验:

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:

一、变性:

利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性:

在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸:

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化:

1、变性温度和时间:

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。

公司正在出售的产品:

牛茨城病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

β-微管蛋白ELISA试剂盒 TUBB免费代测试剂

齿瓣石斛探针法荧光定量PCR试剂盒

登革病毒4PCR检测试剂盒供应

蛋白酪氨激ELISA试剂盒 PTK免费代测试剂

猪肺炎支原体PCR检测试剂盒供应

心病毒(SAFV)核检测试剂盒

Cystin1蛋白ELISA试剂盒

马蛔虫探针法荧光定量PCR试剂盒

口蹄疫病毒基因分型PCR检测试剂盒

蛋白体亚基β6ELISA试剂盒

马冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猫嗜衣原体染料法荧光定量PCR试剂盒

端粒重复序列结合因子1ELISA试剂盒

产气肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

蜱传出血热病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移13ELISA试剂盒

传染性造血器官坏死病毒(IHNV)核检测试剂盒

平尾毛细线虫探针法荧光定量PCR试剂盒

二磷甘油变位ELISA试剂盒

禽传染性支气管炎病毒流行株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猫瘟病毒(FPV)核检测试剂盒

反式高尔基体网状结构蛋白2ELISA试剂盒

蓝氏贾第鞭毛虫型PCR检测试剂盒

猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

芳犬尿氨甲酰胺ELISA试剂盒

诺氏疟原虫PCR检测试剂盒直销

帕腊南病毒PCR检测试剂盒

分拣连接蛋白12ELISA试剂盒

马杜拉放线菌PCR检测试剂盒

流感嗜血杆菌PCR检测试剂盒说明书

7α-羟化(CYP7A)ELISA试剂盒

禽痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

牛棒杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

人上皮特异性抗原(ESA)检测试剂盒elisa

犬血巴尔通体染料法荧光定量PCR试剂盒

鼠附红细胞体(鼠嗜血支原体)探针法荧光定量PCR试剂盒

rTEV蛋白酶人白细胞酯(LE)试剂盒ELISA

莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒

田鼠分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

β-微管蛋白(TUBB)ELISA Kit

产肠毒性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

鹿源性成分(Deer)核检测试剂盒

人催乳(PRL)试剂盒ELISA

病毒H5N1亚型PCR检测试剂盒