BCA Protein Assay Kit公司正在出售的产品:树鼩胚胎成纤维细胞 GTPIMAP家族成员4封闭多肽 波萨达斯球孢子菌PCR检测试剂盒 大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒 山含量活性比色法检测试剂盒 奈良链霉菌 4号染色体开放阅读框32抗体
更新时间:2024-01-12
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
描述:BCA 蛋白质定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根 据目前世界上常用的蛋白浓度检测方法之一-BCA (bicinchoninic acid)法改良研制而成,该试剂盒具有蛋白 浓度测定的简单性,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。本试 剂盒的原理是蛋白质分子中的肽键结构在碱性环境下能与 Cu2+络合生成络合物,将 Cu2+还原成 Cu+,而 BCA 试剂可 敏感特异地与 Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物,并在 562nm 处有最大光吸收值,该复合物颜色深浅与蛋白质浓度 成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白的含量,1 小时内 即可完成蛋白定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA) 溶液作为蛋白质标准溶液,测定范围为 25~2000 μg/ml。该 试剂盒可用于 20 次试管检测或 200 次 ELISA 板检测。
操作方法
1. 标准品的稀释:按下表将 BSA 进行稀释。
管号 PBS
BSA 体积
(来源)
BSA 终浓度
(μg/ml)
A 0 300 μl (母液) 2000
B 125 μl 375 μl (母液) 1500
C 325 μl 325 μl (母液) 1000
D 175 μl 175 μl (B 管) 750
E 325 μl 325 μl (C 管) 500
F 325 μl 325 μl (E 管) 250
G 325 μl 325 μl (F 管) 125
H 400 μl 100 μl (G 管) 25
I 400 μl 0 0
2. BCA 工作液的配置:根据样品数量及测定方法,将 BCA Reagent A 和 BCA Reagent B 按体积比 50:1充分混匀即可。
注意:配制 BCA 工作液前请将 BCA Reagent A 混匀。
3. 标准比色杯测定方法
(1)吸取 0.1 ml 的各标准品和待测样品置于合适的管中。
(2)加入 2 ml BCA 工作液,充分混匀。
(3)37℃孵育 30 min,然后室温静置 10 min。
(4)紫外分光光度计于 562 nm 处检测吸光度。
(5)绘制标准曲线。
(6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
4. 微管测定方法
(1)分别取 25 μl 新鲜配制的 BSA 标准液和待测样品,加入到 ELISA 反应板中。
(2)每孔加入 200 μl BCA 工作液,充分混匀。
(3)37℃孵育 30 min,然后室温静置 10 min。
(4)酶标仪于 562nm 处检测吸光度。
(5)绘制标准曲线。
(6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项
1. 待测样品浓度在 25~2000 μg/ml 的范围内具有良好的线性关系。
2. BCA 工作液配制后 24 小时内使用效果稳定。
3. BCA 法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。
4. 使用普通的分光光度计测定时,需根据比色皿的最小检测体积,适当加大 BCA 工作液的用量,使其不小于最小检测体积,样品和标准品的用量可相应按比例调整。
5. 适用范围
实例操作 按上述操作方法可得到如下标准工作曲线,该线性方程经过 多次绘制,系数均为 0.0001,且 R 2 值均在 0.99~1 之间, 重复性好,在计算蛋白浓度时可直接用该标准工作曲线进行 计算。例如:在 562 nm 处检测吸光值为 0.1,则此时 y 值 为 0.1,代入方程 y=0.0001x 中,可得蛋白浓度为 1000 μg/ml。
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-PJ1098 | BCA Protein Assay Kit | 50-500T |
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
公司正在出售的产品:
疟原虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 癌蛋白诱导转录物3ELISA试剂盒 OIT3免费代测试剂 | 猪流感病毒(H1型)探针法荧光定量PCR试剂盒 |
库蠓通用PCR检测试剂盒供应 | 蛋白二硫键异构ELISA试剂盒 PDI免费代测试剂 | 犬新孢子虫PCR检测试剂盒供应 |
脑膜炎奈瑟菌W群(NM-W)核检测试剂盒 | 半胱氨蛋白抑制剂AELISA试剂盒 | 马立克氏病病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒 | 蛋白酪氨磷受体KELISA试剂盒 | 马立克氏病病毒1型染料法荧光定量PCR试剂盒 |
猫附红细胞体(猫嗜血支原体)染料法荧光定量PCR试剂盒 | 动力蛋白激活蛋白6ELISA试剂盒 | 里氏埃里希氏体探针法荧光定量PCR试剂盒 |
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普雷沃菌属通用PCR检测试剂盒 | 耳蝶呤2ELISA试剂盒 | 禽传染性支气管炎病毒Ark型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
猫杯状病毒前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | 二肽基肽3ELISA试剂盒 | 类志贺邻单胞菌核检测试剂盒 |
麦芽香肉杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 泛激2ELISA试剂盒 | 诺如病毒Ⅰ型 / Ⅱ型 / 札如病毒核检测试剂盒 ( 三重荧光 PCR 法 ) |
皮炎芽生菌PCR检测试剂盒 | 腓骨蛋白2ELISA试剂盒 | 马蛔虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
流感病毒H6亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法) | 人蛋白激C beta II(PKC-bII)ELISA检测试剂盒 | 禽波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
牛副流感病毒3型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 人抗鼠抗体(HAMA)试剂盒elisa | 链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 |
肠道病毒71型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | BCA Protein Assay Kit人臂板蛋白4C(Sema 4C)ELISA试剂盒 | 扇革蜱通用PCR检测试剂盒 |
龟分枝杆菌PCR检测试剂盒 | 人β内啡肽(β-EP)ELISA Kit | 对虾桃拉综合症病毒(TSV)PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
呼吸道合胞病毒A 型(RSV-A)核检测试剂盒 | 人促肾上皮质激释放激(CRH)ELISA Kit | 禽结核分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |