OG 橙绿变色管公司正在出售的产品:5-8转基因鼻咽癌细胞系 磷化雌激反应指状蛋白封闭多肽 牛副流感病毒型PCR检测试剂盒 大鼠凝血受体(TR)试剂盒 ELISA 红N脱甲基(ERND)活性比色法检测试剂盒 罗左贝尔氏菌 四分子交联体17抗体(四旋蛋白)
更新时间:2024-01-12
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 | 产品名称 | 规格 |
A-PJ1022 | OG 橙绿变色管 | 96T |
橙绿变色染料(OG Dye)以烘干的形式预加在八联管盖上。本管用于 LAMP 扩增反应,当反应结束时,
将 0.2 ml EP 管颠倒,并溶解位于管盖上的 OG 染料后。LAMP 的反应产物将与 OG 染料形成绿色肉眼可见变色反应(阳性),而未扩增的 EP 管为深橙色(阴性)。本试剂管常温长期保存。
保存:室温避光储存,2 年内有效。
使用注意事项:
在配制完 LAMP 反应体系后,轻弹 EP 管底部后,再盖上OG 橙绿变色管,盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置,以防止将管盖上的 OG 染料溶解,OG 染料一旦混入反应液中将会终止 LAMP 反应。
PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;电泳槽:用于分离PCR扩增产物;核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
PCR相关基础实验:
PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
一、变性:
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
二、退火或称接合,复性:
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
三、延伸:
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR反应条件优化:
1、变性温度和时间:
保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
公司正在出售的产品:
小隐孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 补体C1qELISA试剂盒 C1q免费代测试剂 | 流感嗜血杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 |
枝孢霉通用PCR检测试剂盒直销 | 丛状蛋白B2ELISA试剂盒 PLXNB2免费代测试剂 | 同詹姆士城峡谷病毒PCR检测试剂盒直销 |
高致病性H亚型病毒核检测试剂盒 | Cullin5蛋白ELISA试剂盒 | 猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
对虾杆状病毒PCR检测试剂盒 | 大疱性类天疱疮抗体ELISA试剂盒 | 猫免疫缺陷病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
马疥螨染料法荧光定量PCR试剂盒 | 蛋白酪氨磷1BELISA试剂盒 | 茹拉巴德古柏线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
禽传染性支气管炎病毒JMK型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 低密度脂蛋白受体相关蛋白2ELISA试剂盒 | 猪附红细胞体(SEP)核检测试剂盒 |
病毒H3N2(AIV-H3N2)核检测试剂盒 | 动力蛋白胞浆1重链1ELISA试剂盒 | 苹果锈果类病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
马可尼小囊虫PCR检测试剂盒 | 3ELISA试剂盒 | 流感病毒N3亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
马尔太虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 多效调节因子1ELISA试剂盒 | 牛分支杆菌卡介苗PCR检测试剂盒供应 |
禽传染性支气管炎病毒荷兰株PCR检测试剂盒 | 泛蛋白DELISA试剂盒 | 猫杯状病毒PCR检测试剂盒 |
类鼻疽伯克霍尔德菌PCR检测试剂盒(荧光PCR法) | 人分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)检测试剂盒elisa | 佩氏着色霉探针法荧光定量PCR试剂盒 |
诺如病毒G3型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 人类似cDNA顺序BC027382试剂盒ELISA | 梨孢镰刀菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
艾利希体属(埃立克体属)通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | OG 橙绿变色管人带3蛋白(Band3)ELISA试剂盒 | 彭氏变形菌PCR检测试剂盒 |
肺炎病毒PCR检测试剂盒 | 人α1微球蛋白(α1-MG)试剂盒 ELISA | 鲤疱疹病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核检测试剂盒 | 人补体片断5b(C5b)ELISA检测试剂盒 | 葡萄球菌属通用PCR检测试剂盒 |